BMB523: Rekombinante humane proteiner, ekspression, oprensning og karakterisering (5 ECTS)

STADS: 01004601

Niveau
Bachelorkursus

Undervisningsperiode
Kurset er placeret i forårssemesteret.
3. kvartal.

Ansvarlige undervisere
Email: ogi@bmb.sdu.dk

Yderligere undervisere
bag@bmb.sdu.dk

Skemaoplysninger
Vis hele skemaet
Vis personligt skema for dette kursus.

Kommentar:
Maksimalt deltagerantal 16

Indgangskrav:
Ingen

Faglige forudsætninger:
BMB503 og BMB504 skal være fulgt.
Kurset kan ikke tages af studerende, der har bestået BK55 Recombinante humane proteiner.

Kursusintroduktion
Ved anvendelse af MBP_tag ekspressionsvektoren pMal udtrykkes et humant proteinkinasegen i E.coli. Rekombinant proteinkinase oprenses og karakterisieres. Teknikker: Radioaktivt protein kinase aktivitets test. Affinitetskromatografi på amylose. SDS-PAGE analyser. Westernblot/immundetektering. Proteolytisk kløvning af MBP-taggen. Stabilitets undersøgelser med og uden MBP-tag. De fleste proteinkinaser kræver en endogen fosforylering for at blive aktiv. Ved anvendelse af en luminometrisk test måles aktivitetsstatus af Chk2 kinasen inden og efter behandling med fosfatasen. Ekspression og og detektering med autoradiografi af protein kinase CK2 er udført i en koblet transkription/translations assay (RTS, Roche).

Kompetencer
Forklar hvordan Expression plasmids er designet
Nt protein inkl. affinity chromatography
Proteolytic cleavage
Behandling af radioactive isotoper
Fremstilling af protein kinase og kinestiske kalkulationer
Forklar hvordan protein kinaser er reguleret
Kend baggrunden for parrede transcription/translation expressions systemer

Forventet læringsudbytte
Ved afslutningen af kurset forventes den studerende at kunne forklare på solo 5 niveauet:

Designe en strategi for kloning af cDNA ind i bakterielle ekspressionsplasmider.
Beskrive, hvordan en succesfuld kloning bekræftes, og hvordan ekspression af rekombinante proteiner tjekkes.
Beskrive de nutidige affinitetskromatografiteknikker, som anvendes til at oprense rekombinante proteiner med en tag.
Udføre et proteolytisk kløvningseksperiment til fjernelse af tags fra rekombinante proteiner.
Håndtere radioaktive isotoper sikkert og korrekt (gennem beskrivelse af sikkerhedsmålinger under håndtering af radioaktive isotoper).
Udføre proteinkinaseaktivitetstests, inkl. beregning af kinetiske parametre.
Forklare, hvordan proteinkinaser er reguleret.
Forklare rollen af fosfataser i signalering. Udføre defosforyleringstests med aktive proteinkinaser. Forklare rollen og vigtigheden af specifikke fosfatasehæmmere.
Udføre en luminometrisk proteinkinasetest med enzymer i det aktive (fosforyleret) og det inaktive stadie (defosforyleret).
Beskrive grundlaget for den luciferase-baserede kinasetest.
Forklare baggrunden for et koblet transkriptions/translations-assay system og udføre en test i praksis.

Emneoversigt
De indledende forelæsninger dækker hovedemner som f.eks.: ekspresionssystemer, affinitetsproteinoprensning, karakterisering af rekombinante proteiner. SDS-PAGE, Westernblotting, proteinkinase aktivitetstest

Litteratur
Der er i øjeblikket ikke angivet nogle materialer for kurset.

Kursets hjemmeside
Dette kursus benytter e-learn (blackboard).

Forudsætningsprøver
Ingen

Eksamen- og censurform:
Skriftlig rapport der evalueres med bestået/ikke-bestået og intern censur ved underviser.
Rapporten afleveres i grupper af 2 personer, men skal bestås individuelt.

Reeksamen efter 4. kvartal

Vejledende timetal
På naturvidenskab er undervisningen tilrettelagt efter trefasemodellen dvs. intro, trænings- og studiefasen.

Forelæsninger, antal timer 5.
Laboratorieøvelser, antal timer 45.

Deltagerne må holde små oplæg, der forklarer teorien bag eksperimenterne (optionelt).
Aktiviteter i studiefasen

Sprog
Dette kursus undervises på engelsk, hvis der deltager internationale studerende, ellers undervises på dansk.

Kursustilmelding
Se tilmeldingsfrister.

Pris for åben uddannelse
Se priser for enkeltkurser.

Denne kursusbeskrivelse var gyldig fra 1. februar 2009 til 31. januar 2011.