BMB523: Rekombinante humane proteiner (5 ECTS)

STADS: 01002301

Niveau
Bachelorkursus

Undervisningsperiode
Kurset er placeret i forårssemesteret.
3. kvartal.

Ansvarlige undervisere
Email: ogi@bmb.sdu.dk

Yderligere undervisere
bag2bmb.sdu.dk

Skemaoplysninger
Vis hele skemaet
Vis personligt skema for dette kursus.

Kommentar:
Maksimalt deltagerantal ?

Indgangskrav:
Ingen

Faglige forudsætninger:
BM113 eller (BMB503 og BMB504) skal være fulgt.
Kurset kan ikke tages af studerende, der har bestået BK55 Recombinante humane proteiner.

Kursusintroduktion
Ved anvendelse af His_tag ekspressionsvektoren pQE30 udtrykkes et humant proteinkinasegen i E. coli. Rekombinant proteinkinase oprenses og karakteriseres. Teknikker: Isolering af humant RNA, cDNA syntese ved hjælp af RT_PCR, indsættelse af cDNA i vektoren, transformering af ekspressionsstammen E. coli, ekspression af proteinkinase samt oprensning i lille målestok, SDS-PAGE, Westernblotting, proteinkinase aktivitetstest, sucrose gradientanalyse, retikulocytlysat-baseret in vitro translation.

Kompetencer
Forklar hvordan Expression plasmids er designet
Nt protein inkl. affinity chromatography
Proteolytic cleavage
Behandling af radioactive isotoper
Fremstilling af protein kinase og kinestiske kalkulationer
Forklar hvordan protein kinaser er reguleret
Kend baggrunden for parrede transcription/translation expressions systemer

Forventet læringsudbytte
Ved afslutningen af kurset forventes den studerende at kunne forklare på solo 5 niveauet:

Designe en strategi for kloning af cDNA ind i bakterielle ekspressionsplasmider.
Beskrive, hvordan en succesfuld kloning bekræftes, og hvordan ekspression af rekombinante proteiner tjekkes.
Beskrive de nutidige affinitetskromatografiteknikker, som anvendes til at oprense rekombinante proteiner med et tag.
Udføre et proteolytisk kløvningseksperiment til fjernelse af tags fra rekombinante proteiner.
Håndtere radioaktive isotoper sikkert og korrekt (gennem beskrivelse af sikkerhedsmålinger under håndtering af radioaktive isotoper).
Udføre proteinkinaseaktivitetstests, inkl. beregning af kinetiske parametre.
Forklare, hvordan proteinkinaser er reguleret.
Forklare baggrunden for gelfiltreringsanalyser.
Forklare rollen af fosfataser i signalering. Udføre defosforyleringstests med aktive proteinkinaser. Forklare rollen og vigtigheden af specifikke fosfatasehæmmere.
Udføre en luminometrisk proteinkinasetest med enzymer i det aktive (fosforyleret) og det inaktive stadie (defosforyleret). Beskrive grundlaget for den luciferase-baserede kinasetest.
Forklare baggrunden for et koblet transkriptions/translations-assay system og udføre en test i praksis.

Emneoversigt
De indledende forelæsninger dækker hovedemner som f.eks.: polymerasekædereaktion, RNA kontra DNA, bakterietransformation, ekspresionssystemer, proteinoprensning, karakterisering af rekombinante proteiner.

Litteratur
Der er i øjeblikket ikke angivet nogle materialer for kurset.

Pensum
Se pensumbeskrivelse.

Kursets hjemmeside
Dette kursus benytter e-learn (blackboard).

Forudsætningsprøver
Ingen

Eksamen- og censurform:
a) Mundtlig eksamen med karakter efter 7-skalaen og ekstern censur.
b) Skriftlig rapport der evalueres med bestået/ikke-bestået og intern censur ved underviser. Rapporten afleveres i grupper af 2 personer.

Vejledende timetal
På naturvidenskab er undervisningen tilrettelagt efter trefasemodellen dvs. intro, trænings- og studiefasen.

Forelæsninger, antal timer 5.
Laboratorieøvelser, antal timer 45.

Deltagerne vil holde små oplæg, der forklarer teorien bag eksperimenterne.
Aktiviteter i studiefasen

Sprog
Der er ikke registreret nogle oplysninger om undervisningssproget.

Bemærkninger
Dette kursus undervises på engelsk, hvis der deltager internationale studerende, ellers undervises på dansk.

Kursustilmelding
Se tilmeldingsfrister.

Pris for åben uddannelse
Se priser for enkeltkurser.

Denne kursusbeskrivelse var gyldig fra 1. september 2007 til 31. januar 2009.